ОКРАСКА БАКТЕРИЙ ПО ГРАМУ
Цель работы: изучить особенности окрашивания грамположительных и грамотри−цательных бактерий.
Материалы и оборудование: микроскоп, предметные и покровные стёкла, красители (карболовый генвианвиолет, фуксин), 10%−й раствор йода, этанол, раствор Люголя).
Ход работы
1. При обработке фиксированных клеток бактерий сначала кристаллическим фиолетовым, а затем раствором этанола с йодом на поверхности бактериальных клеток образуется окрашенный комплекс. При последующей обработке этано−лом грамположительные бактерии остаются окрашенными. У грамотрицательных бактерий окраска вымывается, и они обесцвечиваются. При докрашивании фуксином грамположительные бактерии имеют сине−фиолетовый цвет, грамотрицательные — красный.
2. Приготовьте бактериальный препарат до стадии фиксирования.
3. Фиксированный препарат в течение 2 мин окрашивайте карболовым генцианвиолетом через фильтровальную бумагу.
4. Снимите бумагу и, не промывая водой, протравливайте препарат раствором Люголя. При этом препарат чернеет.
5. Слейте раствор Люголя и на 30 с нанесите на препарат раствор этанола с йодом.
6. Быстро промойте препарат водой. Высушите между полосками фильтровальной бумаги.
7. Докрасьте препарат фуксином в течение 2 мин через фильтровальную бумагу.
8. Смойте краску водой, высушите между полосками фильтровальной бумаги и рассмотрите под микроскопом.
9. Сделайте вывод об особенностях окрашивания грамположительных и грамотрицательных бактерий.
ОКРАСКА БАКТЕРИЙ ПО ГРАМУ
Цель работы:
Изучить особенности окрашивания грамположительных и грамотрицательных бактерий.
Материалы и оборудование:
Микроскоп, предметные и покровные стёкла, красители (карболовый генцианвиолет, фуксин), 10%−й раствор йода, этанол, раствор Люголя.
Ход работы
1. Принцип окрашивания по Граму:
При обработке фиксированных бактериальных клеток карболовым генцианвиолетом и раствором этанола с йодом на поверхности клеток образуется окрашенный комплекс. У грамположительных бактерий комплекс сохраняется, и они остаются окрашенными. У грамотрицательных бактерий окраска вымывается, и они обесцвечиваются. Докрашивание фуксином приводит к красной окраске грамотрицательных бактерий, в то время как грамположительные остаются сине−фиолетовыми.
2. Приготовление бактериального препарата:
Приготовил бактериальный препарат, подготавливая бактерии до стадии фиксирования на предметном стекле.
3. Окрашивание карболовым генцианвиолетом:
Окрашивал препарат карболовым генцианвиолетом в течение 2 минут, используя фильтровальную бумагу для равномерного распределения краски.
4. Обработка раствором Люголя:
После снятия фильтровальной бумаги протравливал препарат раствором Люголя в течение нескольких секунд. Препарат приобрел черный цвет.
5. Обработка раствором этанола с йодом:
После того как раствор Люголя был слит, нанес на препарат раствор этанола с йодом на 30 секунд. Это позволило завершить образующийся комплекс.
6. Промывание и сушка:
Быстро промыл препарат водой, затем высушил его, используя полоски фильтровальной бумаги.
7. Докрашивание фуксином:
Докрасил препарат фуксином в течение 2 минут, используя фильтровальную бумагу.
8. Промывание и сушка:
Смыл фуксин водой и снова высушил препарат между полосками фильтровальной бумаги.
9. Рассмотрение препарата под микроскопом:
Рассматривал препарат под микроскопом. В поле зрения микроскопа грамположительные бактерии были окрашены в сине−фиолетовый цвет, а грамотрицательные — в красный.
10. Вывод:
Окраска по Граму позволяет различать два типа бактерий: грамположительные, которые сохраняют сине−фиолетовую окраску, и грамотрицательные, которые после окрашивания фуксином приобретают красный цвет. Эти различия объясняются структурными особенностями клеточных стенок бактерий.
