Выполните лабораторную работу «Каталитическая активность ферментов (на примере амилазы)» на с. 201.
Цель: доказать каталитическое действие белков−ферментов, показать их высокую специфичность, а также зависимость их действия от условий среды.
Оборудование: штатив с пробирками, мерный цилиндр объёмом 50 мл, пипетки, водяная баня или термостат, термометр.
Реактивы: лёд, 1 %−ный раствор крахмала, 1 %−ный раствор иода в иодиде калия (раствор Люголя), 5 %−ный раствор сульфата меди (II), 10 %−ный раствор гидроксиданатрия, 2 %−ный раствор сахарозы, 0,2 %−ная соляная кислота, свежий 3 %−ный раствор пероксида водорода.
Ход работы:
1. Приготовление раствора слюны, содержащего фермент амилазу.
− Тщательно прополощите рот водой.
− Наберите 2−4 мл слюны в мерный цилиндр.
− Добавьте в цилиндр воды до объёма 10 мл.
2. В две пронумерованные пробирки налейте по 10 капель раствора крахмала.
3. В пробирку № 1 внесите четыре капли воды (контроль), а в пробирку № 2 − 4 капли раствора слюны.
4. Перемешайте и поставьте на водяную баню или в термостат на 15 мин при температуре 37°С.
5. Из пробирки № 2 возьмите четыре капли исследуемого вещества и внесите их в две разные пробирки (по две капли в каждую). В одну из них добавьте каплю раствора иода в иодиде калия. В другую − каплю раствора сульфата меди (II) и четыре капли раствора гидроксида натрия и осторожно нагрейте до кипения. Те же действия проделайте с содержимым контрольной пробирки (№ 1).
6. Оформите полученные результаты в виде таблицы.
7. Сделайте вывод на основе проведённого исследования.
Пробирка | Результат | Результат после закипания |
---|---|---|
№ 2.1 − с каплей раствора йода в иодиде калия | Мы наблюдаем красное окрашивание с расщеплением крахмала | После закипания цвет исчезает (раствор обесцвечивается) |
№ 2.2 − с каплей раствора сульфата меди (II) и 4−мя каплями раствора гидроксида натрия | Мы видим синее окрашивание | Появление желтого осадка, который становится красно−коричневым |
№ 1.1 − с каплей раствора йода в йодиде калия | Появляется васильковое окрашивание в результате образования комплексного соединения | Обесцвечивание раствора |
№ 1.2 − с каплей раствора сульфата меди (II) и 4−мя каплями раствора гидроксида натрия | Раствор становится мутным | Раствор становится черного цвета |
Вывод: в данном случае белок амилаза представляет собой фермент, который расщепляет (гидролизует) крахмал до мономеров. Данный фермент действует в зависимости от условий среды (температура).